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          上海通蔚生物告訴你ELISA四大常用方法優(yōu)缺點(diǎn)
          更新時(shí)間:2024-06-12   點(diǎn)擊次數:61次
            相信經(jīng)常用elisa試劑盒做實(shí)驗的人都知道,有四種常用的方法來(lái)檢測,他們分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。今天給大家分享下他們的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。
           
            1.間接法(indirect ELISA)
           
            此測定方法與直接法類(lèi)似,差別在于一級抗體沒(méi)有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來(lái)測定抗原量。
           
            優(yōu)勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它*多的免疫反應性。
           
            缺點(diǎn):交互反應發(fā)生的機率較高。
           
            2.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
           
            被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量;或不標記,再透過(guò)酶標記的二級抗體來(lái)測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。
           
            優(yōu)勢:高靈敏、高專(zhuān)一性,抗原無(wú)須事先純化。
           
            缺點(diǎn):抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結合部位。
           
            3.直接法(direct ELISA)
           
            將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
           
            優(yōu)勢:操作手續簡(jiǎn)短,因無(wú)須使用二抗可避免交互反應。
           
            缺點(diǎn):試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。
           
            4.競爭法(competitive ELISA)
           
            樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體,當樣品里的自由抗原越多,就可以結合越多的抗體,而固定抗原就只能結合到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來(lái)與只有固定抗原的對照組結果相比較,根據呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。
           
            優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,而且數據再現性很高。
           
            缺點(diǎn):整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。
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